分子生物学实验
- 基因组学
- 基本操作
- 基因组 DNA 的提取
- 加入 SDS（动）或 CTAB 和液氮（植）研磨，苯酚、氯仿抽提
- 核酸凝胶电泳
- 重组载体构建
- PCR
- qPCR
- 定时定量 PCR，带荧光检测，对扩增 DNA 的累积速率绘制动态变化图
- Ct 值是产物荧光强度首次超过设定阈值时 PCR 反应所需的循环数
- DNA 文库构建
- 测序
- 一代测序：Sanger 测序
- 二代测序：高通量测序
- 人类基因组计划
- 功能基因组学
- 基因表达研究
- RNA-seq
- RNA 选择性剪接
- 内含子保留、5’选择性剪接、3’选择性剪接
外显子遗漏剪接、互相排斥性剪接
- 原位杂交
- 使用标记的核酸探针定位和定量细胞或组织中的特定核酸序列
- 包括 RNA 原位杂交和染色体原位杂交
- 荧光原位杂交：对探针进行特殊修饰和标记，经原位杂交与目标序列结合
与荧光素分子相偶联的单克隆抗体来确定目标序列位置
- 定点突变
- 基因敲除
- 基本原理
- 用外源已突变基因经同源重组的方法替换内源的正常同源基因
使内源基因失活而表现突变体性状
- 分为完全基因敲除、条件型基因敲除
- 高等动物基因敲除
- 植物基因敲除
- 基因组编辑
- 蛋白质及 RNA 互作
- 酵母单杂
- 酵母双杂
- 蛋白质互作研究
- 等离子表面共振（SPR）（外）
- 免疫共沉淀（CoIP）（外）
- GST 及 GAD 融合蛋白沉降（外）
- 荧光共振能量转移（FRET）（内）
- CHIP-seq
- RNAi
- 其他
- 凝胶滞缓实验（EMSA）
- 噬菌体展示
- 蛋白质磷酸化分析
- 蛋白质免疫印迹
- 细胞定位即染色技术
- 全基因组关联分析及应用
- GWAS，以单核苷酸多态性为分子遗传标记进行
全基因组水平上的相关性分析
- 转录组学
- 总 RNA 提取
- 常用异硫氰酸胍-苯酚抽提法，最常使用 Trizol 试剂
- mRNA 纯化
- cDNA 合成
- cDNA 文库构建
- 基因文库筛选
- ncRNA 研究
- 基因克隆
- RACE
- RAMOAGE 技术
- Gateway 大规模克隆技术
- 图位克隆法
- 热不对称交错多聚酶链式反应
- 蛋白质组学